在《Biacore检测蛋白与小分子相互作用的常见问题（上）》中我们着重介绍了在实验设计以及样品准备方面的问题，在本文的下篇中，我们还是从智荟专线收集的客户咨询出发，将继续讨论在实验进行过程中和最终的数据分析阶段可能遇到的常见问题，并逐一揭开上篇中遗留的各个悬念……
一、关于溶剂校正的问题
溶剂校正流程贯穿于前期的样品准备、之后的样品检测以及 的数据分析，是检测蛋白与小分子相互作用实验中非常关键的一个步骤，也是Biacore检测蛋白与小分子互作的一大优势。
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什么情况下需要进行溶剂校正？
当运行缓冲液中含有高折光率（refractiveindex）的成分，且此时在活性通道上的配体量较高时，运行缓冲液流经活性通道时会存在一定的体积排阻效应，导致活性通道与参比通道上的信号存在差异[1]（如下图1所示）。
图1.运行缓冲液的高折光率与高偶联造成活性通道与参比通道的信号差异[1]。
如果运行缓冲液以及不同浓度的分析物样品的折光率能保持严格一致，则上述的通道间差异也是一个定值了，将不会对最终互作结果产生影响；然而实际情况下，由于样品配制误差等原因，缓冲液与分析物样品间的折光率误差往往难以避免。以DMSO为例，1%DMSO的加入会导致响应值信号上升约RU[1]，而小分子分析物本身与配体结合产生的响应值是较小的，因此DMSO浓度的微小变化也会引起显著的影响。此时就需要进行溶剂校正，来修正这种由于高折光率物质（例如DMSO等）浓度的细微偏差导致的响应值信号显著变化，得到最准确的互作数据。
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如何进行溶剂校正？
以最常见的DMSO为例，溶剂校正的核心思路是设置一系列含有不同浓度DMSO的校正溶液，浓度范围覆盖实验中所用的DMSO浓度（例如运行缓冲液和分析物样品中均含5%DMSO，则校正溶液中浓度范围可以是4.5%-5.8%），以此来包含样品与buffer配制过程中引入的DMSO浓度的误差。使校正溶液按照浓度顺序（从低到高或者从高到低）依次进样，流经参比通道与活性通道后，以参比通道的响应值为横坐标、活性通道扣减参比通道的响应值为纵坐标进行作图，得到溶剂校正曲线（如下图2所示）。根据样品在参比通道的信号，就可以通过校正曲线对应得到活性通道扣减参比通道的校正值。而此过程在Biacore上，都是全自动完成的，有专用向导式程序指引，无需手动操作。
图2.典型的溶剂校正曲线示意图[1]。
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如何判断溶剂校正的结果是否正常？
如果按照上述的例子，对含有5%DMSO的样品以4.5%-5.8%的范围进行溶剂校正，最终得到的溶剂校正曲线横坐标范围一般要落在-到+RU，校正曲线图谱中的两条竖线代表的是分析物中DMSO浓度范围，要求落在校正曲线的范围内，并且拟合的Chi2值小于2[1][2]。
如果溶剂校正的结果出现异常，可以留意以下几方面的问题：（1）建议使用高品质的DMSO试剂，并且使用相同来源的DMSO溶解小分子和配制所需溶液。（2）注意校正溶液的配制策略，例如只需配制含4.5%和5.8%DMSO的这两种缓冲液，中间梯度通过这两种溶液按照不同比例混合得到，而不需要一个个单独配制。（3）由于DMSO具有吸潮的性质，在配制过程中应及时封闭，避免长时间敞口放置；在上机检测时，也应该对样品管进行密封。为此，Biacore独特的全密闭样品舱设计，及配套专用的孔板封膜及EP管橡胶盖就派上用场了。
关于溶剂校正步骤的具体操作方法，可以扫描文末
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